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ELISA试剂盒质量平衡及试验标准
发布时间:2017-09-19   点击次数:440次

ELISA试剂盒质量平衡及试验标准

在ELISA试剂盒中通常有3次加样步聚,即加标本,加酶物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行溅起,不行发作气泡。
加标本通常用微量加样器,按规则的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴,避免发作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加样。
有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液,再在其间参加血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。加酶物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程敏捷完结。在ELISA试剂盒中通常有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA检查试剂盒中似不恰当。
ELISA试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有平等的和固相抗的时机,只要zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐,因而需经分散
ELISA试剂盒才干到达反响的结尾。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的也相同如此。这即是为什么ELISA检查试剂盒反响总是需求必定时刻的温育。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是试验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体的适宜温度。在树立ELISA办法作反响动力学研讨时,试验表明,两次抗原抗体反响通常在37℃经1-2小时,产品的生成可达高峰。为加快反响,可进步反响的温度,有些试验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中,以构成zui多的沉积。但因所需时刻太长,在ELISA试剂盒中通常不予选用。
ELISA试剂盒的质量凹凸要素取决于这两个方面
1.选材对象。
2.选材进程。
ELISA试剂盒胎牛血清用于选材的胎牛应健康无病并且在指定的出世天数以内,选材进程应严厉按照操作规程履行,制备出的血清要经过严厉的质量鉴定。格外请求有:
a.要经过滤膜过滤除菌,确保无菌;
b.证实所用血清中不含对所出产疫苗病毒的按捺物;
c.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家请求无细菌噬菌体污染;
d.对细胞有杰出的支撑繁衍效果;
e.有必要来自有文件证实无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具有恰当的监测体系。

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