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菌体内毒素清除剂操作说明书
发布时间:2017-10-16   点击次数:418次

菌体内毒素清除剂

Bacterial Endotoxin Erasol

产品及特点

内毒素(即lipopolysaccharides,LPS)是E.coli细胞壁的主要成分,传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来,然后再用各种方法去除其中的内毒素,操作繁琐,DNA回收率低。本产品可以直接把E.coli表面的内毒素去除,从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取,重组蛋白质提取)的污染。本产品具有下列特点:

  • *在菌体收集阶段去除内毒素的产品,从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触,从根本上防止了可能产生的污染。
  • 操作简单快速,用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素,只需要10分钟左右时间,不需要复杂仪器设备。
  • ,能去除99%以上的内毒素。
  • 跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容,DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA丢失率可以高达50%)。
  • 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
  • 既可小规模使用(在1.5 mL离心管内),也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。

规格及成分

成 份

编 号

200 mL包装

本产品

90901

200 mL

使用手册

90901sc

1份

 

运输及保存

常温运输保存,有效期一年。

自备试剂

使用方法

一:用于菌液小于3 mL的样品

  • 收集1.5-3 mL  E.coli饱和菌液,12,000 rpm离心1分钟,弃上清,得到细菌沉淀。
  • 加入1 mL本产品温和混匀后10,000-12,000 rpm离心1分钟,弃上清(含内毒素)。
  • 再重复上述操作3-4次,得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。

二:用于菌液多于3 mL的样品

整个操作同上,只是在15或50 mL 塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力,本产品的用量按比例增加。

常见问题

Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?

A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同,所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附,离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子),能够形成大小不等的聚合物,跟质粒DNA和蛋白质大小接近,所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

关联产品

固相内毒素清除剂(CAT#:60608)

背景资料

 

内毒素的分子结构

 

 

 

 

外毒素vs.内毒素

 

区别要点

外毒素(Exotoxin

内毒素(Endotoxin

存在部位

由活的细菌释放至细菌体外,为细菌的代谢产物

为细菌细胞壁结构成份,细胞破裂后释出

细菌种类

以革兰氏阳性菌多见

革兰氏阴性菌多见

化学特性

蛋白质(分子量27~900 KDa),易被分解破坏,热不稳定60℃以上能迅速破坏

磷脂一多糖一蛋白质复合物(毒性主要为类脂A),不易被分解破坏,耐热60℃耐受数小时

毒性作用

强,微量对实验动物有致死作用(以ug计量)。各种外毒素有选择作用,引起特殊病变,不引起宿主发热反应。抑制蛋白质合成,有细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代谢等

稍弱,对实验动物致死作用的量比外毒素为大。各种细菌内素的毒性作用大致相同。引起发热、弥漫性血管内凝血、粒细胞减少血症、施瓦兹曼现象等

抗原性

强,可刺激机体产生价的抗毒素。经甲醛处理可脱毒成为类毒霉,仍有较强的抗原性,可用于人工自动免疫

弱,刺激机体对多糖成份产生抗体,不形成抗毒素,不能经甲醛处理成为类毒素而使毒性消失

其他

几乎无发热性,对肿瘤细胞无影响

很强的发热性,破坏肿瘤细胞

例子

白喉毒素,肉毒毒素,破伤风毒素厌氧菌毒素,溶血性链球菌毒素等

大肠杆菌,霍乱绿脓菌,沙门氏菌,赤痢菌等。

 

 

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