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ELISA试剂盒实验条件的选择与应用范围
发布时间:2017-04-25   点击次数:295次

ELISA试剂盒实验条件的选择与应用范围

ELISA试剂盒跟着科研试验的前进,现已被越来越多的试验者认可。ELISA法成功地运用于多种病原微生物所导致的流行症、寄生虫病及非流行症等方面的免疫诊断。也已运用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,ELISA试剂盒的运用可归纳为四个方面:1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2、研讨抗酶抗体的组成。3、闪现微量的免疫沉淀反响。4、定量检查体液中抗原或抗体成份。


ELISA试剂盒进行各项试验条件的挑选是很主要的,其间包含:

(1) 固相载体的挑选:很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,调查其显色反响是不是均一性,据此判明其吸附功能是不是杰出。

(2) 包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,请求纯度要好,吸附时一般请求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相一起,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量起码的浓度。关于多数蛋白质来说一般为1~10μg/ml。

(3) 酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采纳“方阵法”(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式试验体系里地滴定其作业浓度。

(4) ELISA试剂盒酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选请求是价廉、安全、有明显地显色反响,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后,应参加强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜配制,尤其是H2O2在临用前参加。

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