新闻中心您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 全血基因组DNA提取试剂盒的操作步骤说明
全血基因组DNA提取试剂盒的操作步骤说明
发布时间:2017-05-16   点击次数:510次

全血基因组DNA提取试剂盒的操作步骤说明

全血基因组DNA提取试剂盒的操作步骤
1、样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lml-1ml血液样品):
a、在血液样品中加入2-3倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200ul溶液YA,振荡至彻底混匀。
b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20u1,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200ul溶液YA,振荡至彻底混匀。
2、向悬浮液中加入20ul 的RNase A (10mg/ml),充分颠倒混匀,室温放置10min。
3、加入20ul的蛋白酶K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。
4、加入200ul溶液YB,再加入200ul无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。
5、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。
10、离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。
使用全血基因组DNA提取试剂盒注意事项
1、本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响;若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
什么是全血基因组DNA提取?利用明胶的吸附作用,使红细胞沉降在管底与白细胞分离。通过SDS的破膜作用,使白细胞释放出DNA,然后利用酚和抽提纯化,分离除去蛋白质,zui后用乙醇沉淀吸出DNA。公司自产的全血基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够、专一吸附DNA,可zui大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
 

上海钰博生物科技有限公司

上海钰博生物科技有限公司

地址:上海市沪闵路6088号龙之梦大厦8楼806室

主营产品:Elisa试剂盒,重组蛋白,抗体,免疫组化试剂盒,生化试剂,微生物培养基等产品批发,

©2019 版权所有:上海钰博生物科技有限公司  备案号:沪ICP备15014166号-1  总访问量:116103  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆

技术咨询