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细胞培养的惨痛经验教训
发布时间:2017-06-06   点击次数:293次

细胞培养的惨痛经验教训

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丢了 ,培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?
早走早脱身,从此专注黑生物
       1. 严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。
2. 不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。
3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4. 水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换 (灭菌水加进去)。
5. 晚上离开的时候给细胞房照紫外,超净台是用完就开。
6. 的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
非科班出身经验分享
1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换,如果用酒精灯就什么都稍微烤一下,别直接放到火上,离一段距离。
2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡,动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了,稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来,留一点,枪的zui头部尽量深的在液面以下。
3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍,包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的,用前用后都照个 30 分钟。
5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台,又比如培养箱内部。
6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培养基的话zui多zui多不要超过 2 天就要换一次。细胞可以不传代,但是培养基是一定要换的。
大概就是,不该碰的地方不碰,有影响的地方少碰; 该使劲的时候不含糊,不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯,所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验,心疼钱就还是不要做了。
zui后一点点非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了,放了 5 天吧,感觉都长了几层出来,培养基都黄了。抱着试一试的心情传了一次,又坚强的活过来了。当然,状态肯定也差的很了。
换种心情,好好生活!
养了三年细胞,各种肿瘤细胞,说一点自己的看法:
1. 培养细胞前,可以看看细胞特点说明书,包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不同细胞生长周期不同,有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了,有的又是特别慢,等的人心焦,BT474 就是,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。
3. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间,每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。
4. 冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基。
5. 培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。
6. 养细胞zui大的教训:不能偷懒!
细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。
1. 不管买的细胞、惠赠的细胞,刚拿到手赶紧做两件事:检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存。
2. 发现有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染,真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,买个支原体检测的 kit 定期检测一下。
3. 细胞房日常的值日清洁是必须的,此外还要定期熏蒸。
4. 细胞的传代一定要规律,保持相同的 confluency 和传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延。
5. 注意个人卫生。
靠内心感动细胞
1. 自己的细胞自己养,血的教训。
2. 在生物安全柜 (或者超净台),枪头,血清管,血清,培养基,瓶子都足够好,并且细胞房有良好的卫生措施 (比如隔离服,手套,口罩,清洁,HEPA 等等) 且不违法操作原则的情况下,你其实很难污染。
3. 上述条件不完备的情况下,就要多注意无菌操作了:比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好,因为会挡住紫外线),使用前 SDS+酒精擦台子,进出超净台一定要酒精擦手。
4. 少对细胞说话,多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不可以的!) 至少 1 天看 1 次。
养细胞很容易
养细胞真的不难,zui关键几点:
1. 所有的东西使用的,如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的,真的很难相信你会把细胞养坏。
2. 动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓的细胞状态差,很多时候是传代的原因。
3. 有时间的话,需要细胞计数,传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措。
4. 要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,细胞房的实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验。
5. 个人的实验器具自己收一套,不要和别人混用,zui近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢。
6. 细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。
细胞养不好,自挂东南枝
现在一大型药企养细胞做检测,工作量很大,很多地方都没办法非常仔细的做。但是两年下来只出现过一次污染,总结一下心得:
1. 好的洁净室,空调系统跟得上。
2. 好的生物安全柜,硬件跟的上。
3. 瓶子移液器吸头大都是进口,耗材跟的上。除了这些就是自己的操作习惯了。
4. 任何东西不要从敞开的瓶口上面经过。
5. 虽然酒精灯会干扰安全柜气流但是还是需要一盏用来勤烧瓶口。
6. 实验时所用材料的位置摆放要顺手,污染源和已灭菌物品要分开放置。
养细胞就像打仗
细胞饲养涵盖的内容太广了,而且不同种类细胞的饲养难度以及技术要求不同,肿瘤细胞,成纤维细胞,上皮细胞... 甚至各类干细胞... 每一种都有自己的生长要求。如果只是单纯的一般性操作,大同小异,个人觉得练好技术的情况下注意几点就好:

1. 各种无菌,从培养基到操作过程再到培养箱,时刻注意无菌。本人曾经所在的实验室出现过大规模污染并zui终导致所有细胞集体毁灭... 教训惨痛。
2. 培养基的配制一定要做好梯度摸索并详细记录,否则细胞死都不知道怎么死的。
3. 尽量提高操作熟练度,减少培养皿在培养箱外的滞留时间,细胞很脆弱,经不起折腾,不像人,热了有空调,冷了能烤火。
4. 把握好培养基更换的时间,不同细胞类型时间不同,早了浪费试剂,晚了可能全军覆没。
5. 经验很重要,养细胞的很多经验你是无法在公开的书籍和资料上找到的。多向实验室前辈学习,他们会让你少走很多弯路,真的。
养细胞就像打仗,知彼知己,百战不殆。只有了解你养的对象,才能把他养好。
细胞就是矫情
养细胞细胞这个东西呢有的时候真说不清。养过一段时间的巨噬细胞,一开始操作各种谨慎小心,随时默念各种无菌原则,培养基什么的都用的进口的,其实国产货真的不差,有钱就是任性! 但细胞还是萎靡不振,两个多星期过后实在懒得管,换液等操作也很随意的草草进行,酒精也懒得喷,结果这货却开始疯长,过了几天居然达到一天要传一次代,而且数量甚至可以一传三, 所以说,有的细胞就是矫情。

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